农产品粗蛋白质的凯氏定氮测定方法

农产品粗蛋白质的凯氏定氮测定方法【君翰锐仪】

开氏法

(一)方法要点

将样品在催化剂参与下用硫酸消煮，使其中的有机氮——蛋白质氮转化为无机氮——铵态氮后，加碱蒸出氨用2%硼酸吸收，然后用标准盐酸溶液滴定氨，得到氮的含量，再乘以系数，即得粗蛋白的含量。

(二)试剂

1.浓硫酸

2.40%氢氧化钠溶液

3.2%硼酸吸收液

4.溴甲酚绿—甲基红指示剂

5.混合催化剂 将五水硫酸铜10克、硫酸钾100克在研钵中研细，混匀后全部通过40目筛。

6.0.0500摩/升盐酸标准溶液

(三)分析步骤

1.消煮 准确称取风干磨细通过40目筛的样品0.5000克，放入100毫升开氏瓶(或君翰JH-BDN型凯氏定氮仪消化炉)中，加几滴水润湿样品，加催化剂2克，加浓硫酸3～5毫升，轻轻摇匀内容物，使混合均匀，放置数小时后加热，在开氏瓶口置一小漏斗，在电炉上加热，开始时用小火，待泡沫消失后再加大火力，保持内容物沸腾。使内容物回流液到开氏瓶口2/3处回流，消煮至溶液呈透明蓝绿色后，再继续消煮20-30分钟，豆类则继续消煮60分钟，消煮结束后取下开氏瓶冷却。

2.蒸馏 将开氏瓶(或凯氏定氮仪消化炉)中的消煮液用热水全部洗入蒸馏瓶中(每次用少量热水，多冲洗3～4次),总体积300毫升左右，连接蒸馏装置，冷凝器的上端通过定氮球连接蒸馏瓶，冷凝器的下端插入盛有20毫升已调整好的2%硼酸接收液，检查连接装置是否漏气，开启冷却水，从逸气阀中加入40%氢氧化钠溶液30毫升，立即塞紧，打开电炉开始蒸馏。蒸馏约30分钟，再换一盛有2%硼酸吸收液的三角瓶，若吸收液不变色即为蒸馏完毕，关闭电炉，打开逸气阀，用蒸馏水冲洗冷凝管，用标准盐酸溶液滴定硼酸吸收液由蓝转到淡红色即为终点。

同时取无氮蔗糖0.5克代替样品，按与样品相同的完整步骤进行空白试验。

(四)结果计算

粗蛋白质（%）=c×(V₁-V₀)×14×K×100/(m×1000)

式中：c——盐酸标准溶液的浓度；

V₁——样品滴定消耗盐酸标准溶液的体积(毫升);

V₀——空白蔗糖代替样品滴定消耗盐酸标准溶液的体积(毫升);

14——氮的摩尔质量(克);

K——换算因数；

m——样品的质量(克)。

换算因数K必须按GB 5009.5-2025及具体食品类别选择。原页面表格对应关系已错位，删除后不再作为计算依据。

由于在测定中未经蛋白质分离沉淀，其中包括游离的氨基酸、酰胺等含氮非蛋白质化合物，故一般用此法测得的蛋白质为粗蛋白质。

公式说明：c为盐酸标准溶液浓度（mol/L），V₁和V₀分别为样品与空白滴定体积（mL），K为对应食品的氮-蛋白质换算因数，m为样品质量（g）。

安全提示：浓硫酸消化和强碱蒸馏需在通风和防护条件下进行，防止暴沸、倒吸，含铜废液分类收集。