地表水体富营养化程度的评价

1.实验目的

(1)根据布点采样原则，选择适宜方法进行布点，掌握测定水体总氮、总磷、COD及初级生产力的采样和监测方法。

(2)根据参数指标的监测结果，学会用参数法和综合营养状态指数法评价水体的富营养化状况。

2.实验原理

我国湖泊富营养化评价的基本方法主要有参数法、综合营养状态指数(TSI)法(营养度指数法)、评分法、数学评价法等。该实验通过测定总氮(TN)、总磷(TP)、叶绿素a含量(chla)和初级生产力等指标，利用参数法和综合营养状态指数法对湖泊水体富营养化进行相关评价。

3.实验材料

仪器设备与试剂详见COD、总氮、总磷的测定实验，多参数水质测定仪JH-LMW8000。

4.实验步骤

1)COD的测定

参见君翰多参数水质测定仪JH-LMW8000型

2)总氮的测定

参见君翰多参数水质测定仪JH-LMW8000型

3)总磷的测定

参见君翰多参数水质测定仪JH-LMW8000型

4)水藻类叶绿素a的测定

(1)实验目的。

①熟悉水体浮游植物藻类的采样方法。

②掌握叶绿素a的提取及测定方法。

(2)实验原理。

水样中的藻类经过过滤后，用90%丙酮溶液提取叶绿素a,于分光光度计上测定吸光度，根据叶绿素a在特定波长下的吸收计算其含量。

(3)实验材料。

仪器：分光光度计、抽滤装置、离心机、醋酸纤维滤膜及有机玻璃采样器。试剂：碳酸镁粉末，90%丙酮溶液。

(4)实验步骤。

①水样的采集与保存。采水器一般为有机玻璃采水器，水样量视水体中浮游植物多少而定，一般应采0.5～2L,将采到的水样注入水样瓶中，放在阴凉处，避免阳光直射；如经较长时间才进行水样的进一步处理，则应置低温(0～4℃)保存，并加入1%碳酸镁悬浊液，添加量为每升1mL,以防止水样酸化引起色素的降解。

②抽滤。在抽滤器上装好0.45μm醋酸纤维滤膜，倒人定量体积的水样进行抽滤。水样抽完后，继续抽1～2 min,以减少滤膜上的水分。

③提取。取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱中低温干燥6～8h后取出，把滤膜放入组织研钵中，加入少量碳酸镁粉末0.05g(如在采水样中已加入碳酸镁悬浊液此步可省去)和2～3 mL的90%丙酮溶液充分研磨，提取叶绿素a。

④离心。将研钵匀浆转入离心管中，用离心机(3000～4000 r/min)离心10min,将上清液倒入5mL或10mL容量瓶中，再加入2～3mL90%丙酮溶液，继续研磨提取，离心10min,并将上清液再转入5mL或10mL容量瓶中，重复1～2次，*后用90%丙酮溶液定容至5mL或10 mL,摇匀。

⑤吸光度测定。将上层清液倒入1cm比色皿中，以90%丙酮溶液为参比，用分光光度计分别读取波长750 nm、663 nm、645 nm、630 nm处的吸光度。

(5)结果计算。

叶绿素a(mg/m³)=V₁×[11.64×(D₆₆₃-D₇₅₀)-2.16×(D₆₄₅-D₇₅₀)+0.10×(D₆₃₀-D₇₅₀)]/V×δ

式中：V为水样体积，L；D为吸光度；V₁为提取液定容后的体积，mL；δ为比色皿的光程，cm。

【注意事项】

①叶绿素a测定时要求波长750 nm处的吸光度值低于0.005,目前采用的醋酸纤维滤膜过滤，离心后的上清液很难达到要求，用0.45μm孔径聚四氟乙烯有机相针式滤器抽滤可有效降低试样浊度，达到吸光度低于0.005的要求。

②为避免研磨样品转移时产生的损失，可将带有浮游植物的滤膜直接放入具塞试管中，用吸管加入90%丙酮溶液10 mL置于冰箱，低温提取6～8h,其他步骤相同。